AHARIBO 新生肽及RNA分析
2026-01-16
2026-01-16
AHARIBO是Immagina公司開發的對活性核糖體上的新生肽,及mRNA進行平行分析的技術。其命名源于疊氮丙胺酸(azidohomoalanine, AHA)及核糖體Ribosome。AHA是甲硫胺酸(Met)的類似物,可以扮演Met的角色,參與肽合成。
在培養基中,用AHA替代Met, 對細胞進行培養,可以人為地將AHA摻入到新合成的肽段中,然后再添加翻譯阻斷劑sBlock (sBlock是Immagina公司是一眾阻斷物中篩選出的專利產品)。由于AHA上有疊氮基,可以與DBCO(二苯并環辛炔)發生加成環-烴反應,生成穩定的三唑環,我們可以用DBCO修飾的磁珠與細胞共孵育,此時DBCO與新生肽上的AHA反生點擊化學反應(click reaction),將磁珠與新生肽結合在一起:形成磁珠-新生肽-核糖體復合物。再通過磁分離方法,就可以將處于翻譯中的核糖體純化出來。

DBCO修飾的磁珠與AHA上的疊氮基發生點擊化學反應
由于只有正處于翻譯中的核糖體才有可能摻入AHA,這樣就保證了,我們拉下來的是處于翻譯狀態下的活性核糖體(Active Ribosome)。我們知道,一條mRNA可以結合多個核糖體,因此,我們得到是多聚核糖體(Polyribosomes),而不是像Ribolace一樣,經RNA酶處理后的單個active ribosome。

AHARIBO 分析流程
新合成蛋白肽與RNA的平行分析,可以真實反應mRNA與新合成蛋白之間的關系,相對于單純的mRNA 或是新生肽分析,更具說服力。
<p style="-webkit-tap-highlight-color: rgba(0, 0, 0, 0); margin: 0px 0px 24px; padding: 0px; outline: 0px; max-width: 100%; clear: both; min-height: 1em; color: rgba(0, 0, 0, 0.9); font-family: " pingfang="" sc",="" system-ui,="" -apple-system,="" blinkmacsystemfont,="" "helvetica="" neue",="" "hiragino="" sans="" gb",="" "microsoft="" yahei="" ui",="" yahei",="" arial,="" sans-serif;="" font-size:="" 17px;="" letter-spacing:="" 0.544px;="" text-align:="" justify;="" box-sizing:="" border-box="" !important;="" overflow-wrap:="" break-word="" !important;"="">AHARIBO 可以 AHARIBO RNA及AHARIBO Protein kit分別提供,前者分析RNA,后者分析新生肽,也可以將兩種分析合成一個kit提供。AHARIBO在經過不斷的優化后,雖然原理沒有改變,但其所用的磁珠在上述兩種試劑盒中是不同的。上一篇
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Ribo+tRNASeq