什么是Detection threthold?
Bangslabs QuickCal?在計算標曲時,在報告回歸R^2的同時,也會報告detection threthold (閾值). 那什么是Detection threthold呢?
在檢測標本時,Detection threthold 反映的是檢測對像的背景信號。比如空白對照的信號為 X ,那么加上數倍的方差后(如3倍或5倍的方差),我們就得到一個判定陽性的值 ,超過這個數值我們就判定為陽性。
在 QuickCal?計算表格中,空白球的雖然不參與標曲的生成,但它總是能讀到一個值 ,這個就是背景值。這個值我們也可以用生成的標曲去計算其MESF或ABC值 ,得到的這個值 就是Detection threthold 。
CAR (G4S Linker) Antigen Density Quantitation Kit (PE)與Bangslabs的MESF(PE)有何不同?
Cell Signaling 公司的CAR(G4S Linker)抗原密度定量試劑盒(PE) 能夠定量分析經過工程化改造、表達含有G4S linker的單鏈抗體可變片段(scFv)嵌合抗原受體(CAR)的細胞表面CAR表達水平。這個試劑盒的原理與Bangslabs的MESF(PE)原理是完全相同的。不同之處在于,該試劑盒配了PE 熒光標記一抗(G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb (PE Conjugate),所以應用范圍窄; 而Bangslabs的MESF(PE)試劑盒需要用戶根據自已的目標,選擇一抗,適配性更好一些。
另外,Cell Signaling公司的該試劑盒認為抗體與抗原是單價結合的,而且一個抗體分子只結合了一個PE蛋白,因此測得的值就是抗原的絕對定量。而Bangslabs的抗體是不是單價與抗原結合,上面有多少個PE分子,需要根據具體的抗體來確認(不同廠家,可能不同),因此嚴格說來,還是相對定量。
Spherotech的RCP-05-05質控球(納米流式)有無官方PMT模板?
Spherotech的網站上并未提供此類內容的正式模板。但廠家已利用 NIST ERF 珠子對數值進行了較準,以適用于 RCP-05-5 各組。Spherotech可提供如類似RCP-30-5A的定制模板。但需要您告知所涉及的具體儀器型號,以便可據此對模板進行相應調整。
QSC與MESF 試劑盒中的ABC值及MESF值是單個細胞或球的還是群組的?
單個細胞或球的。
Bangslabs網站上找不到所用流式細胞儀對應的Quickcal計算模板的,怎么辦?
模板內置的計算公式以及參數都是一樣的,因此所有QuickCal計算模板的結果是一樣。不同在于顯示的窗口不同,如果找不到你儀器對應的模板,您可以將所有的模板下載試用,看看哪個更符合您的習慣。
在用QSC kit時,抗體滴度確認達不到飽合
這一般是抗體非特異性的結合引起的。常見的就是曲線持續上升而不趨于平緩。球體本身是聚苯乙烯,上面有苯環,對疏水的蛋白有吸附作用。當然最快的結合肯定是二抗與一抗之間結合,但如果您的孵育時間過長,就會讓一抗與二抗結合的同時,也會與球體結合。特別是一些蛋白熒光(如PE其分子量較大240kd,更容易與球體直接吸附)。解決的辦法就是減少孵育的時間,孵育后多洗幾次,或是換抗體和加點表活。
RiboLace seq 起始樣品細胞數量最低是多少?
細胞的翻譯水平不同,很難有一個準確的判斷。一般認為最低所需要細胞量為300,000個。某些細胞,如卵細胞,所需要的會更少一些。拿不準的客戶,可以咨詢我們,事實上我們也有針對數量較少細胞的操作方案。
BioMag? BioMag Dextran-coated Charcoal 可以用來替代sigma的C6241嗎?
sigma的C6241是Charcoal, dextran coated, 是不帶磁性的,就是在木碳的外面包了葡聚糖。用于吸附小分子,小分可以通過葡聚糖dextran進入木炭內,而大分子不能。Bangslabs是在磁珠外面修飾了木炭,外面再加一層葡聚糖,這樣的好處是吸附完后,可以通過磁場將磁珠吸附下來,除理起來更方便,而sigma 的可能需要過濾或是離心,不能自動化。
這讓我想到大家都在找純化質譜前處理磁珠,如果感興趣,就來找我吧!